SACCHARASE

Cinétique indirectement établie en colorimétrie

Objectifs
-Etablir indirectement la cinétique de la réaction catalysée par la saccharase en suivant l'apparition du glucose par l'intermédiaire de 2 autres réactions enzymatiques, la dernière conduisant à un produit coloré dont la formation est suivie en colorimétrie.
-Montrer la spécifité de la saccharase vis à vis du substrat.

Principe
-Réaliser la réaction enzymatique en mettant en présence la saccharase de levure et le saccharose. Le glucose produit sert de substrat à une 2^ème réaction catalysée par la glucose oxydase, dont l'un des produits, le peroxyde d'hydrogène sert lui-même de substrat à une 3 ^ème réaction enzymatique catalysée par la peroxydase, réaction d'oxydoréduction qui en réduisant H₂O₂, oxyde un chromogène qui se colore en marron.
-Recommencer avec le lactose à la place du saccharose.

Protocole
-Intégrer le colorimètre dans le dispositif exao, l = 430 nm (max. d'absorption du produit coloré).
-Préparer la cuve: 2ml de sol.de saccharose à 0,1mole / l + 1ml d'extrait enzymatique (saccharase de levure) + 1ml de réactif (god + peroxydase + chromogène réduit non coloré )
Faire le 0 d'absorbance puis enregistrer la courbe A₄₃₀ = f(t).
-Recommencer avec une solution de lactose à 0,1mole / l à la place de la sol.de saccharose, dans les mêmes conditions.
Il faut que god, peroxydase et chromogène ne soient pas limitants.

Résultats