Fermentation alcoolique


Le suivi de la consommation de glucose
et de la production d'éthanol par la levure

( Tp Term S spé )

Objectifs
-Etablir, par une méthode colorimétrique, une relation entre la consommation du glucose et la production d'éthanol par la cellule de Saccharomyces cerevisiae, l'expérimentation étant réalisée avec un faible volume de milieu et une petite quantité de levure (voir également culture en fermenteur) sur une durée d'environ 2,5 heures.
-Compléter l'expérimentation assistée par ordinateur qui permet de suivre l'évolution dans le milieu extra-cellulaire des concentrations de O2, C02, et éthanol avant et après l'ajout de glucose.
Voir résultats Exao.

Principe
Suivre dans une culture de levure en conditions anaérobies d'une part la baisse de la concentration en glucose et d'autre part l'augmentation de celle de l'éthanol, les dosages étant réalisés par des méthodes enzymatiques.

Protocole
- Préculture: environ 1/2 heure avant la séance, placer 50ml de milieu Yeast Nitrogen base avec acides aminés (sans glucose) à 30°C. Ajouter 2 pointes de scalpel de levure ("poudre").
- Solution mère de glucose: 20 ml d'une solution de glucose à 20 g/l (à préparer au moment de l'emploi).
- Mise en route de la culture: dans un tube à essai, 9 ml de préculture + 1 ml de solution glucosée (concentration finale du glucose à t0 = 2g/l ). Recouvrir par une petite épaisseur d'huile de paraffine (anaérobiose). Boucher avec du coton cardé. Incuber à 30°C .
- Prélèvements: réalisés à la micopipette, à travers l'huile de paraffine, le premier après 45 min d'incubation.
- Dosages: un prélèvement de 10 µl de culture pour doser l'éthanol et un de 20 µl pour doser le glucose suffisent, les réactifs enzymatiques sont fournis ainsi qu'un étalon glucose (1g/l) et un étalon éthanol ( 0,8 g/l). Pour plus de précision sur le protocole: voir compléments.
- Résultats

Professeur: Auclair Jean Jacques