Une
forme oxydée et une forme réduite
pour le cytochrome c
Objectif
de l'expérimentation :
montrer qu'il y a bien une forme oxydée et une forme réduite du cytochrome
c et qu'on peut
passer de l'une à l'autre.
Principe de l'expérimentation :
passer de la forme oxydée du cytochrome à la forme réduite
et suivre le passage en Exao par spectrophotocolorimétrie, réaliser
le spectre d'absorption de chacune des formes.
Protocole expérimental :
-Obtenir 100 % de forme oxydée: le cytochrome c fourni
comprend les 2 formes. Il faut le dissoudre dans un tampon phosphate (pH
= 7,4) puis essayer dans un premier temps d'obtenir
100 % de forme oxydée. Pour cela, ajouter à 2,5 ml de solution
un petit cristal d'hexacyanoferrate de potassium qui est un puissant
oxydant. Suivre la baisse d'absorbance à l =
550 nm contre
un "blanc" convenablement préparé. Quand
l'absorbance reste constante, on peut considérer que la solution contient
100 % de cyt.c ox. Ici,
l'absorbance a peu baissé car la forme oxydée était majoritaire.
-Réaliser le spectre d'absorption de la forme oxydée.
-Suivre
la réduction en Exao: dans la cuve contenant
la forme oxydée, ajouter une petite quantité de dithionite
de sodium, puissant réducteur et suivre à l =
550 nm l'augmentation d'absorbance
en fonction du temps. S'assurer que les variations ne sont pas dues
au réducteur ajouté.
-Réaliser le spectre d'absorption lorsque la solution contient 100 % de forme
réduite.
Résultats :
