Marquage des lymphocytes

pour une analyse par cytométrie en flux

Préparation des cellules
Il faut obtenir, à partir d'un prélèvement sanguin, une suspension de cellules monodispersées, débarrassée des globules rouges. Si l'analyse est centrée sur les sous-populations de lymphocytes, la préparation (lymphoprep) de l'échantillon cellulaire est optimisée pour répondre à cet objectif.
Les cellules sanguines ainsi préparées sont mises en présence d'anticorps monoclonaux capables de se lier spécifiquement à des marqueurs membranaires. Chaque anticorps est conjugué à un fluorophore.

Les Clusters de Différenciation (CD), cibles du marquage
Pour caractériser les lymphocytes T par rapport aux autres, en particulier des LB, on cible le marqueur CD3, complexe protéique associé au récepteur T. On peut distinguer les sous-populations de LT en ciblant le corécepteur CD4 pour les LT4 et le corécepteur CD8 pour les LT8.
Les CD sont reconnus par des anticorps monoclonaux. Les fluorochromes utilisés ici sont nécessairement excités par la lumière incidentes (l= 488 nm), il s'agit de Fluorescein IsoThioCyanate (FITC) qui émet dans le vert spectral, de PhosphoErythrin (PE) qui émet dans le orange et Peridin Clorophyll Protein (PerCp) qui émet dans le rouge.