par
différentes enzymes de restriction
Séparation des fragments de restriction
par électrophorèse
Tp Ts Spé.
Objectifs
La séquence de travaux pratiques proposée ici prolonge l'expérimentation "transformation bactérienne". Elle s'insère parfaitement dans le programme de TS Spécialité et permet de découvrir le mode d'action des enzymes de restriction en manipulant l'ADN plasmidique qui a servi de vecteur pour réaliser une transgenèse bactérienne. L'approche vraiment expérimentale est complétée par un travail sur la séquence du plasmide avec Anagène et par l'utilisation de modèles moléculaires. Pour exploiter pleinement cette expérimentation, il est souhaitable que les élèves aient réalisé auparavant la manipulation "transformation bactérienne par le vecteur plasmidique pGlo".
Protocole
L'expérimentation peut être réalisée avec des produits fournis par Bio-Rad. Les étapes du protocole (non détaillé ici) sont les suivantes:
- Digestion séparée du plasmide pGLO par HindIII, EcoRI, PstI dans les conditions optimales ( tampon, 37°C, 30 min).
- Electrophorèse en gel d'agarose(1%) des fragments de restriction obtenus, d'un marqueur de taille (ADN du phage l digéré par HindIII ) et du plasmide non digéré (40 min).
- Révélation du gel soit rapide (15 min) soit lente (4 h). Le gel coloré peut être conservé et interprété à la séance de TP suivante.
Résultats. Commentaires
