Couplage entre les 2 phases
de la photosynthèse
-Phase photochimique de la photosynthèse: ensemble de réactions d'oxydo-réduction initiées par l'absorption de photons et qui conduit à la réduction d' un accepteur final d'électrons (et H+), les oxydo-réductions étant couplées avec la synthèse d'ATP.
-Les propriétés de la molécule d'ATP.
-Cycle de Calvin
-Spectres d'absorption des formes oxydée (R) et réduite (RH2) du NADP.
Le principe
Etudier, en Exao, les
2 réactions enzymatiques du cycle de Calvin qui suivent la fixation
du CO2 et qui conduisent à une molécule-clé de la phase
non photochimique , le triose-P.Tester la nécessité de l'intervention
de l'ATP et suivre l'oxydation en colorimétrie (baisse de A 340)
du NADPH.
Les réactions étudiées
APG = acide phosphoglycérique ou 3-phosphoglycérate
Molécule en C3 di P = 1-3 diphosphoglycérate
Triose P = glycéraldéhyde 3-phosphate
Pi = phosphate inorganique
E2 = PGK
= phosphoglycérate kinase
E3
= GAPD = glycéraldéhyde phosphate déshydrogénase
Le matériel et les produits chimiques
- Spectro couvrant
le proche UV , intégré
à une chaîne Exao.
- Logiciel Enzymo.
- Micropipette.
- Solution APG dans tampon.
- Solution d'enzymes PGK + GAPD.
- NADPH prédosé.
- Solution d'ATP.
Tous les produits sont disponibles chez SIGMA.
Le protocole
- Sélectionner la
longueur d'onde 340 nm.
- Préparer la cuve de référence: 1ml de tampon
avec APG + 20
µl de la solution d'enzymes + 1,5 ml d'eau.
- Faire le zéro d'absorbance sur le "blanc".
- Choisir durée: 1 ou 2 min.
- Ajouter 0,3 mg de NADPH au contenu de la cuve, agiter puis replacer
la cuve dans le spectro, l'absorbance doit être comprise entre 0,6 et
1. Enregistrer.
- Retirer la cuve du spectro, ajouter maintenant 0,1 ml de la solution d'ATP
(très faible incidence sur le volume total), agiter très rapidement,
replacer la cuve dans le spectro. Enregistrer.
