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		Transformation bactérienne Protocole expérimental

Chaque groupe d'élèves dispose d'une "culture-mère" de E.coli sensible à l'ampicilline, de 4 boîtes de pétri à ensemencer préparées avec une gélose nutritive LB, dont 2 contenant de l'ampicilline et une de l'ampicilline et de l'arabinose. Des pipettes et ensemenceurs stériles, la solution de plasmide et la solution de transformation ( CaCl₂) sont également fournis aux élèves. Il faut prévoir de la glace et un bain chauffé à 42°C . Le protocole n'est pas ici décrit en détail, seules les principales étapes sont mentionnées. - Transformation Les bactéries (une colonie) prélevées dans la "culture-mère" (image à gauche) sont placées en suspension dans la solution de transformation + pGLO, puis soumises à un choc thermique par passage brutal glace-bain à 42°C pendant 50s-glace. Les 2 traitements (chimique et thermique) conjugués facilitent l'entrée du plasmide dans la cellule bactérienne. Un échantillon témoin de E.coli (une colonie) est préparé de la même façon mais les bactéries ne sont pas mises en présence du plasmide. - Encemensement Les bactéries ainsi préparées sont utilisées pour ensemencer méthodiquement par étalement (voir image à droite) les différents milieux pré-coulés de manière à obtenir 4 types de cultures: - LB avec E.coli sans pGLO (n°4) - LB/amp avec E.coli sans pGLO (n°3) - LB/amp avec E.coli + pGLO (n°2) - LB/amp/ara avec E.coli + pGLO (n°1) - Croissance Les boîtes ensemencées sont placées à 37°C pendant 24 h.