Différents niveaux pour le phénotype "fluorescence"

des bactéries transgéniques

Le phénotype (macroscopique) "fluorescence" est facilement repérable en observant les colonies de bactéries transformées exposées aux UV. Il s'agit ici d'essayer de visualiser cette fluorescence au niveau cellulaire puis d'extraire la GFP, protéine responsable de ce phénotype.
Culot de bactéries transformées exposées aux UV.
Suspension de bactéries transformées exposées aux UV.
Suspension de bactéries transformées (surtout des fragments de colonies) exposées aux UV et observées au microscope (faible grossissement).

Suspension de E. coli transformées observées au microscope (barre = 10µm) en lumière naturelle (à G) et en UV (à D).

La faible intensité de la lampe UV ne permet pas d'observer les bactéries à un fort grossissement. De plus, leur fluorescence individuelle est trop faible pour être rigoureusement détectée avec le matériel utilisé. Cependant, ce type d'observation montre clairement que la fluorescence globale d'une colonie correspond à la somme des fluorescences cellulaires individuelles.

GFP en solution, exposée aux UV.
Extraction : action du lysozyme sur la paroi bactérienne suivie d'un court séjour au congélateur. Une centrifugation permet d'éliminer les débris cellulaires.
Le surnageant constitue l'extrait observé.
L'extrait ne contient plus de cellules bactériennes. La fluorescence verte est donc bien due à une molécule initialement présente dans la bactérie et passée ici en solution.
L'étape suivante de l'expérimentation devrait être la séparation et purification de la GFP par chromatographie (TP en gestation).
La fluorescence est bien verte mais elle est moins intense que celle émise par la suspension de bactéries transformées. L'image ne rend pas bien compte de la couleur que prend la solution.