Electrophorèse

du plasmide pGLO

Le plasmide qui est utilisé pour le transfert de gènes dans la bactérie est fourni lyophilisé, en très petite quantité.On croirait même que le flacon est "vide". Il est donc intéressant de vérifier, qu'après reconstitution, pGLO est bien présent dans la solution de transformation.
Une électrophorèse va permettre, d'une part de vérifier qu'il y a bien de l'ADN dans la solution de transformation et d'autre part d'identifier par sa taille le plasmide pGLO.

Protocole
Electrophorèse en gel immergé d'agarose à 0,8% sous une tension de 100v, pendant 45 min.
Révélation du gel avec bleu de méthylène.
Marqueur de taille: ADN phage l digéré par HinD III

L'image montre une électrophorèse en cours: début de la migration

Résultats
L'électophorégramme révèle la présence de 2 sortes d'ADN qui diffèrent par leur vitesse de migration dans le gel.On ne retrouve pas la bande correspondant à un fragment de 5371 pb (taille de pGLO) mais il ne faut pas oublier que la molécule d'ADN du plasmide est circulaire et qu'elle peut prendre différentes configurations ce qui influe sur sa vitesse de déplacement dans l'agarose.
Chaque bande correspond à une structure que peut prendre le plasmide. La forme la plus abondante qui a migré comme un fragment linéaire du marqueur de taille d'environ 4350 pb correspond à la stucture superenroulée qui, plus compacte, migre plus vite qu'un fragment linéaire de même taille. La forme la moins représentée a migré plus lentement , elle correspond à une structure circulaire, non superenroulée.

La solution de transformation contient bien le plasmide pGLO.