Place de l'expérimentation dans une progression pédagogique
L'expérimentation proposée permet de purifier par chromatographie d'interaction hydrophobe la Green Fluorescent Protein, extraite de bactéries transformées par le plasmide pGLO. C'est le troisième volet (TP3) d'un ensemble qui comprend également les expérimentations suivantes:
- Transformation de E. coli par le vecteur plasmidique pGLO : voir TP1
- Digestion du plasmide pGLO par diverses enzymes de restriction, analyse des fragments par électrophorèse: voir TP2
En 1^ére S, cette séquence pratique peut être proposée après le TP1 (transformation) dans le cadre d'une étude sur la relation "gène-phénotype cellulaire-protéine". Elle peut être prolongée par un travail sur le modèle moléculaire de la GFP (TP4).
En TS spécialité, la séquence, complète le TP1 (transformation) avec la purification de la protéine d'intérêt, l'ensemble visant à appréhender, avec un support concret, les problèmes posés par l'obtention des OGM, dans le cadre du thème sur les biotechnologies. La manipulation du plasmide porteur du transgène de la GFP motive l'analyse de ce vecteur de transformation (TP2) par action d'enzymes de restriction.

Principe de l'expérimentation
Partir des cultures de bactéries transformées qui expriment la GFP obtenues à l'issue du TP1, relancer une nouvelle culture en milieu liquide sélectif et inducteur d'une surexpression de GFP fluorescente. Extraire les protéines des bactéries ainsi cultivées puis procéder à la purification de la protéine d'intérêt en l'isolant par chromatographie. Tenter de vérifier la qualité de la purification par électrophorèse de l'échantillon d'intérêt.
Suivre à la lettre les consignes de sécurité.

• Culture en milieu liquide de bactéries génétiquement modifiées: production de GFP fluorescente
• Extraction de la GFP avec les protéines bactériennes endogènes
• Séparation de la GFP des autres protéines extraites, par chromatographie
• Contrôle, par électrophorèse, de la qualité de la purification