Extraction de la GFP
avec l'ensemble des protéines intracellulaires
de E.coli
Centrifuger 2ml de culture. Conserver le culot. Vérifier qu'il est bien constitué par des bactéries qui expriment la GFP.
Lyse bactérienne
Reprendre le culot bactérien avec un peu de tampon Tris-EDTA et bien remettre les bactéries en suspension.
Provoquer la désorganisation partielle de la paroi bactérienne en ajoutant une goutte de lysozyme, enzyme qui dégrade un composé glucidique complexe de cette paroi. Achever la désorganisation de l'enveloppe (paroi et membrane plasmique) des bactéries en les soumettant à un choc congélation-décongélation. La lyse libère les constituants cellulaires solubles en particulier la GFP.
Elimination des débris bactériens
Centrifuger pour sédimenter les débris cellulaires (culot). Récupérer le surnageant qui comprend, en solution, environ 4000 protéines de E.coli et la GFP (ainsi que araC et b-lactamase). Vérifier que la protéine d'intérêt est bien présente.
