Peroxydase
Effet pH

Tp 1èreS
Les peroxydases ont une grande importance, elles participent à la destruction des peroxydes qui sont toxiques pour les cellules. Elles sont d'autre part utilisées dans certaines techniques immunoenzymatiques mais aussi dans le dosage du glucose ...car leur intervention permet la formation de produits colorés.
Objectifs : étudier en colorimétrie (Exao) l'action du pH sur l'activité d'une enzyme que les élèves peuvent facilement extraire de tissus végétaux, et prolonger l'étude par l'utilisation de modèles moléculaires.

Principe de l'expérimentation : extraire l'enzyme du navet, mettre l'extrait en présence des 2 substrats, le peroxyde d'hydrogène et le gaïacol , l'ensemble étant incolore, puis suivre en colorimétrie la formation du produit coloré, en opérant à différents pH.
Un cycle catalytique oxyde 2 molécules de gaïacol et consomme une molécule de peroxyde mais il conduit à des formes radicalaires qui se polymérisent. Deux cycles sont nécessaires pour former par condensation une molécule de tétragaïacol, produit coloré.

Protocole expérimental :
-Extraction : 10g de navet dans 20ml d'eau distillée. Broyer, filtrer.
-Tampon citrate-phosphate à différents pH (2.2, 4, 5, 6, 7, 8)
-Substrats: peroxyde d'hydrogène à 1 volume dans chacune des solutions tampon et gaïacol à 1/1000 dans chacune des solutions tampon.
-Milieu réactionnel, dans la cuve: 1,5 ml de la solution de chacun des substrats à un pH donné. Ajouter une goutte de l'extrait enzymatique après avoir fait le zéro d'absorbance à l = 440 nm (maximum d'absorption du tétragaïacol).Un filtre bien choisi convient.
-Suivi de la réaction (Exao): enregistrer l'absorbance en fonction du temps (une minute). Elle ne doit pas dépasser 1. Obtenir une cinétique pour chaque pH puis tracer la courbe Vi = f (pH).
Résultats
Professeur: Auclair Jean Jacques