Des anticorps détectés par électrophorèse en gel

TP en TS

IgG1 humaine

Les objectifs
-Réaliser une électrophorèse en gel et analyser un électrophorégramme.
-Vérifier la nature protéique des anticorps, comprendre que cette technique permet de détecter un taux anormal d'anticorps dans le sérum (diagnostic).
-Vérifier que le sérum antitétanique contient bien des anticorps.

Les acquis
-Le principe et la pratique de l'électrophorèse en gel (TP en 1èreS).
-La mise en jeu des Ac sécrétés dans les RI à médiation humorale.
-La structure moléculaire des Ac.
-Le principe de la vaccination et la présence d'Ac anti-anatoxine tétanique dans le sérum Pasteur (Expérience du ring-test réalisée au cours d'une séance précédente).

Le matériel fourni
-Cuves, générateurs, gels, micropipettes, tampon tris-barbital, colorant bleu-acide, transparisant.
-Lecteur d'électrophorégrammes et le logiciel Phorèse (Jeulin) .
-Sérum de lapin témoin, sérum de lapin avec Ac anti-sérum total de cheval (le lapin a reçu une injection de sérum total de cheval).
-Sérum antitétanique Pasteur avec notice indiquant la présence de fragments F(ab')2 d'Ig tétaniques équines.

La manipulation
-L'électrophorèse est réalisée selon le protocole habituel, chaque gel comportant 10 pistes, chacun des dépôts représentant 3µl. La migration dure 25 minutes sous une tension de 80V. Les gels, séchés, sont disponibles pour l'analyse 1h 30 après le début de la manipulation, ils peuvent alors être numérisés au scanner et passés au lecteur.
-Pendant la migration,les èlèves peuvent rechercher sur internet les informations nécessaires pour identifier les fractions sériques séparées (site SEBIA ) et comprendre à quoi correspondent les fragments F(ab')2 présents dans le sérum antitétanique (recherche libre).

Les résultats
-Un gel complet obtenu par un groupe d'élèves de TS2 (professeur: Mme Auclair Yveline).
-L'exploitation d'un autre électrophorégramme par Aline, Aude et Jessica, élèves de TS3 .